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那些年對ELISA試劑盒選擇的困惑
更新時間:2021-09-02   點(diǎn)擊次數(shù):1001次

隔壁的實(shí)驗(yàn)室又發(fā)文章了,我們困在處理數(shù)據(jù)這一環(huán),這幾家的試劑盒檢測數(shù)據(jù)怎么都不一樣?"小編每當(dāng)聽到這句話,每次感受都不同。對那些努力鉆研數(shù)據(jù)的學(xué)者表示深深的同情。那么,造成試劑盒檢測數(shù)據(jù)不一樣的原因,除了一些實(shí)驗(yàn)操作、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等客觀因素外,還有試劑盒質(zhì)量參數(shù),如重復(fù)率、批內(nèi)差、批間差、線性區(qū)間、準(zhǔn)確度(回收率)等。但是,最重要的影響因素可能是作為定量標(biāo)尺的標(biāo)準(zhǔn)品。所以,下面我們就揭曉影響不同ELISA試劑盒檢測數(shù)據(jù)的差異和關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品的幾點(diǎn)疑惑。

定量ELISA試劑盒如何進(jìn)行校準(zhǔn)?

利用國際機(jī)構(gòu)的參考試劑進(jìn)行校準(zhǔn)

目前,定量ELISA試劑盒校準(zhǔn)方法為應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的參考試劑(reference reagent對試劑盒的定量單位進(jìn)行校準(zhǔn)。例如,WHO Reference Reagent,Islet Cell Antibodies, NIBSC code: 97/550。其單位規(guī)定為:每安瓿為20單位胰島細(xì)胞抗體(Islet cell antibodies);或每安瓿為100單位抗GAD65;或每安瓿為100單位抗IA-2。

 

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精準(zhǔn)定量的基石之一:嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)

   市售ELISA試劑盒的檢測指標(biāo)呈多樣化態(tài)勢,至今已知的測定項(xiàng)目種類雖遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于NIBSC/WHO推薦的參考試劑,但只有嚴(yán)格遵守參考試劑的定量單位所生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)品(如前文提到的英國國家生物制品檢定所NIBSC提供的參考試劑)才是生產(chǎn)高質(zhì)量定量ELISA試劑盒的前提條件之一。但是不同廠商的技術(shù)路線和品控標(biāo)準(zhǔn)不同,會導(dǎo)致成品的性能存在差異,進(jìn)而造成檢測數(shù)據(jù)的差異。RSR公司的自身抗體ELISA檢測試劑盒在標(biāo)準(zhǔn)品生產(chǎn)中每個環(huán)節(jié),嚴(yán)格監(jiān)控是否符合以NIBSC參考試劑定標(biāo)的質(zhì)控范圍,因此保證售出的RSR試劑盒定量準(zhǔn)確,高特異性,結(jié)果可重復(fù)性高。

 

精準(zhǔn)定量的基石之二:高度純化重組蛋白

     目前,國內(nèi)外的雙抗原夾心法ELISA試劑盒所用抗原大多數(shù)屬于純化的重組蛋白抗原,競爭法ELISA則更加多樣化,既可能為純化的重組蛋白抗原,也可能為天然蛋白抗原提取物。對此,有些實(shí)驗(yàn)者擔(dān)憂試劑盒中的抗原為何不使用天然蛋白,重組蛋白是否會影響檢測結(jié)果?ELISA試劑盒選擇純化重組蛋白為抗原的主要原因:

 

第一,天然蛋白均存在于復(fù)雜的生物樣本中,大多數(shù)在細(xì)胞或組織中表達(dá)量可能極少,不適于進(jìn)行高度純化或者純化成本高昂,無法獲得大量的天然蛋白。

第二,為保證ELISA試劑盒檢測中抗體和抗原的特異性結(jié)合,在研究之初,通過篩選不同重組蛋白,使樣本中的抗體與重組蛋白抗原間的親和力和特異性達(dá)到最佳。

第三,隨著蛋白表達(dá)和純化技術(shù)的發(fā)展,高度純化的重組蛋白和天然蛋白具有很高的活性相似度,特別是采用真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng),如酵母或昆蟲細(xì)胞等,高度純化的重組蛋白具有更接近自然狀態(tài)的空間構(gòu)象和生物活性。

 

精準(zhǔn)定量的基石之三:科學(xué)生物樣本驗(yàn)證

       隨著國內(nèi)生物技術(shù)的發(fā)展,自主研發(fā)蛋白表達(dá)純化、抗體制備等ELISA試劑盒開發(fā)技術(shù)也在不斷進(jìn)步。除了應(yīng)用NIBSC/WHO推薦的參考試劑對試劑盒進(jìn)行校準(zhǔn)外,也可用一些暫無機(jī)構(gòu)認(rèn)可,但背景信息完整的生物樣本進(jìn)行驗(yàn)證。按照科學(xué)研究方法,采用不同種屬、性別、生命周期階段、種類等因素的生物樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證。

 

如何正確使用ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品?

       ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品需要與其他試劑盒主要組分和待測樣本達(dá)到相同實(shí)驗(yàn)條件。請?zhí)崆?/span>30分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(20-25℃),如果試劑盒需分多次使用,請僅取出本次實(shí)驗(yàn)所需的酶標(biāo)板條和試劑,剩余板條和試劑需按照條件保存。

       RSR ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品可直接使用,無需現(xiàn)用現(xiàn)配,且保存條件與試劑盒一致即可。

 

RSR研發(fā)總部

 

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