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小鼠單克隆抗體制備流程
更新時間:2020-09-18   點擊次數(shù):852次
       小鼠單克隆抗體的相關(guān)內(nèi)容介紹:
   單克隆抗體是人工制備的雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)的,雜交瘤細(xì)胞是由一個經(jīng)抗原激活后的B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成。單克隆抗體優(yōu)點:純度高,靈敏度高,特異性強,交叉反應(yīng)少,制備的成本低。缺點:對技術(shù)有一定的要求,而且通過抗原的化學(xué)處理很容易丟失表位。
  單克隆抗體技術(shù)可應(yīng)用在:蛋白質(zhì)的精細(xì)結(jié)構(gòu)研究、淋巴細(xì)胞亞群的表面新抗原分析、組織相容性抗原檢測、激素和藥物的免疫分析、腫瘤的定位和分類、純化微生物和寄生蟲抗原、免疫治療和與藥物結(jié)合的免疫—化學(xué)療法等。其中在免疫治療的應(yīng)用中,單克隆抗體藥物發(fā)揮了重要作用:利用單克隆抗體與靶細(xì)胞特異性結(jié)合,可將藥物帶至病灶部位,可直接用于人類疾病的診斷、預(yù)防、治療以及免疫機制的研究,為腫瘤的免疫診斷與免疫治療開辟了廣闊的前景。
  小鼠單克隆抗體制備流程:
  1.抗原準(zhǔn)備:原核表達蛋白抗原,或者設(shè)計合成多肽并偶聯(lián)KLH。選擇原核表達蛋白抗原的客戶,可自己提供純化好的抗原(純度>85%),拓普生物也能為你純化蛋白,從構(gòu)建原核表達質(zhì)粒,到獲得純化蛋白。選擇多肽偶聯(lián)的客戶,抗原由拓普生物準(zhǔn)備,合成。
  2.抗原免疫:免疫4只balb/c小鼠,并通過標(biāo)準(zhǔn)程序加強免疫,尾部采血進行ELISA檢測,驗收標(biāo)準(zhǔn)為血清ELISA>10,000。
  3.細(xì)胞融合和篩選:顯示較佳免疫應(yīng)答的balb/c小鼠,將其脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合,通過HAT選擇性培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞。
  4.雜交瘤細(xì)胞篩選:有限稀釋法對雜交瘤細(xì)胞進行篩選,對2-5個陽性母細(xì)胞進行亞克隆,并選一個亞克隆做亞型鑒定。
  5.單克隆抗體大量制備:選擇一個陽性克隆腹腔注射到5只balb/c小鼠進行腹水生產(chǎn)。
  6.單克隆抗體純化:使用ProteinA/G純化抗體,并用ELISA檢測抗體效價。
  小鼠單克隆抗體注意事項:
  1.請根據(jù)實驗需要選擇適工作效價,部分實驗根據(jù)具體實驗情況可在推薦工作效價基礎(chǔ)上進行增加或減小。
  2.短期保存的抗體:如抗體幾周內(nèi)就會使用,收到后推薦在2-8℃保存,2-8℃短暫保存數(shù)周對抗體活性沒有影響。
  3.長期保存的抗體:如抗體需超過1個月后才會使用,請酌情分裝后于-20℃保存。
  4.建議:將抗體保存在冰箱里層,避免溫度變化造成反復(fù)凍融。
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